ไบโอตินเปปไทด์

Biotinylated Peptides คืออะไร?

เปปไทด์ที่เติมไบโอตินคือเปปไทด์ที่ได้รับการดัดแปลงเพื่อรวมไบโอตินมอยอิตีไว้ด้วย การปรับเปลี่ยนนี้ใช้ประโยชน์จากปฏิสัมพันธ์ที่มีสัมพรรคภาพสูง-ระหว่างไบโอตินกับอะวิดินหรือสเตรปตะวิดิน ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการใช้งานทางชีวภาพและชีวเคมี โมเลกุลไบโอตินมีขนาดเล็ก เสถียร และไม่เปลี่ยนแปลงโครงสร้างหรือหน้าที่ของเปปไทด์อย่างมีนัยสำคัญ ขณะเดียวกันก็ช่วยให้จับหรือตรวจจับได้อย่างมีประสิทธิภาพสูงผ่านระบบที่ใช้อะวิดิน-

 

การดัดแปลงทางเคมี
โดยทั่วไปไบโอตินจะถูกแนะนำผ่านทางรีเอเจนต์ไบโอติน (N-ไฮดรอกซีซัคซินิไมด์ไบโอติน) ของ NHS- ซึ่งทำปฏิกิริยากับหมู่เอมีนปฐมภูมิที่พบในปลายเอ็น-หรือเรซิดิวไลซีนของเปปไทด์ ทำให้เกิดพันธะเอไมด์ที่เสถียร

生物素(ไบโอติน) 肽(เปปไทด์)

ซีโอเอช NH₂

| |

+---EDC/NHS---→ 活化羧基（การเปิดใช้งาน） → 缩合（ข้อต่อ）

↓ ↓

ไบโอติน-CONH-เปปไทด์

 

ปฏิสัมพันธ์ที่สัมพันธ์กัน
เปปไทด์ที่เติมไบโอตินสามารถจับอย่างแน่นหนา (Kd ~10⁻¹⁵ M) กับอะวิดินหรือสเตรปตะวิดิน ทำให้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับใช้ในการตรวจวิเคราะห์ที่ต้องการการตรวจจับ การจับ หรือการตรึงการเคลื่อนที่ที่แม่นยำ

กรณีการสังเคราะห์เปปไทด์แบบไบโอทินิเลต

ลำดับเปปไทด์: ไบโอติน-Ahx-YXXXXXRXRRR-NH2

ความยาว: 11A

Purity: >95%

M.W: 1898.32

ลำดับเปปไทด์: ไบโอติน-YXXXXXRXRRR--ERXXXDLXXXXPVXXXXPRR

ความยาว: 31A

Purity: >95%

M.W: 4145.89

 

การใช้เปปไทด์แบบไบโอตินเลต

เปปไทด์ไบโอทินิเลตเป็นเครื่องมืออเนกประสงค์ในการวิจัยและอุตสาหกรรม พร้อมการใช้งานที่หลากหลาย รวมถึง:

การทำให้บริสุทธิ์แบบความสัมพันธ์

ใช้เพื่อทำให้คู่จับ เช่น โปรตีน แอนติบอดี หรือกรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์ โดยการตรึงเปปไทด์ที่เติมไบโอทินิเลตไว้บนเม็ดสเตรปตะวิดิน

ELISA และ Western Blotting

เปปไทด์ที่เติมไบโอตินทำหน้าที่เป็นตัวตรวจสอบในการตรวจจับอันตรกิริยาเฉพาะเจาะจงเมื่อใช้ร่วมกับฉลากฟลูออเรสเซนต์ avidin-HRP หรือ avidin-

พื้นผิวพลาสมอนเรโซแนนซ์ (SPR)

ใช้สำหรับตรึงเปปไทด์บนชิปไบโอเซนเซอร์เพื่อศึกษาปฏิสัมพันธ์

การค้นพบยา

คัดกรองผู้สมัครยาโดยการวิเคราะห์การจับกับเป้าหมายเปปไทด์ที่ไบโอทินิเลต

ภูมิคุ้มกันวิทยา

เปปไทด์ที่เติมไบโอตินถูกใช้เพื่อทำแผนที่อีพิโทป ศึกษาปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจน-ของแอนติบอดี และทำ-การตรวจวิเคราะห์เซลล์

การทำแผนที่อีพิโทปเพื่อการพัฒนาวัคซีน

เปปไทด์ไบโอทินิเลตแบบกำหนดเองถูกนำมาใช้เพื่อระบุเอพิโทปแอนติเจนของโปรตีนไวรัส ซึ่งช่วยในการออกแบบตัวเลือกวัคซีน

โปรตีน-การศึกษาปฏิสัมพันธ์ของโปรตีน

เปปไทด์ที่เติมไบโอตินที่ถูกตรึงไว้บนเพลตที่เคลือบสเตรปตะวิดิน-ทำให้สามารถศึกษาปฏิกิริยาระหว่างลิแกนด์ของตัวรับ-ได้ ซึ่งเผยให้เห็นความสัมพันธ์ในการจับที่สำคัญต่อการพัฒนายา

การเพิ่มประสิทธิภาพภูมิคุ้มกัน

ในการตรวจวินิจฉัย เปปไทด์ที่เติมไบโอตินถูกใช้เป็นแอนติเจนเพื่อปรับปรุงความไวและความจำเพาะของ ELISA สำหรับการตรวจหาตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของโรค

 

อ้างอิง

1. กรีน นิวเม็กซิโก (1975)อะวิดินและสเตรปตะวิดินวารสารชีวเคมี, 131(3), 781-791.

2. Chaiet, L. และ Wolf, FJ (1964)คุณสมบัติของสเตรปตะวิดิน ซึ่งเป็นโปรตีนที่จับกับไบโอติน-ที่ผลิตโดย Streptomycesจดหมายเหตุของชีวเคมีและชีวฟิสิกส์, 106(1), 1-5.

3. Finn, FM, & Titus, G. (1994)Biotinylation ของโปรตีนในการวิจัยและเทคโนโลยีชีวภาพชีวเคมีทางทวารหนัก, 218(1), 1-7.