ปัญหาและวิธีแก้ปัญหาทั่วไปในกระบวนการสังเคราะห์เปปไทด์มีดังนี้:
ปริมาณเปปไทด์: ปริมาณเปปไทด์หมายถึงเปอร์เซ็นต์ของสารเปปไทด์ในตัวอย่างที่สัมพันธ์กับสารที่ไม่ใช่เปปไทด์ ในผลิตภัณฑ์เปปไทด์ นอกเหนือจากตัวเปปไทด์แล้ว ยังรวมถึงส่วนประกอบที่ไม่ใช่เกลือที่ใช้ในระหว่างกระบวนการผลิต เช่น น้ำ ตัวทำละลายที่ถูกดูดซับ ไอออนโคออร์ดิเนชัน และเกลือ ก็รวมอยู่ด้วย
ความคงตัวทางเคมี:
ปฏิกิริยาดีอะมิเดชัน: สารตกค้างของ Asn/Gln จะถูกไฮโดรไลซ์อย่างง่ายดายเพื่อสร้าง Asp/Glu
การไฮโดรไลซิส: พันธะเปปไทด์ในเปปไทด์ถูกทำลายได้ง่ายโดยการไฮโดรไลซิส โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่เกิดจากการมีส่วนร่วมของ Asp โดยเฉพาะพันธะเปปไทด์ของ Asp Pro และ Asp Gly
ปฏิกิริยา Racemization: กรดอะมิโนที่ตกค้างทั้งหมดยกเว้น Gly มีอะตอมของคาร์บอน chiral alpha และมีแนวโน้มที่จะเกิดปฏิกิริยา racemization ภายใต้การเร่งปฏิกิริยาด้วยอัลคาไลน์ สารตกค้างของแอสพีมีแนวโน้มที่จะเกิดปฏิกิริยา Racemization มากที่สุด
- การย่อยสลายโดยการกำจัด: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr และสารตกค้างอื่นๆ ทั้งหมดสามารถย่อยสลายได้ด้วย - การกำจัด ซึ่งมีแนวโน้มที่จะเกิดขึ้นที่ pH ที่เป็นด่างมากกว่า และได้รับผลกระทบจากอุณหภูมิและไอออนของโลหะ
ความมั่นคงทางกายภาพ:
การสูญเสียสภาพ การดูดซับ การรวมตัว หรือการตกตะกอน: การสูญเสียสภาพเปปไทด์มักเกี่ยวข้องกับการทำลายโครงสร้างระดับตติยภูมิและทุติยภูมิ ในสถานะที่เสียสภาพเปปไทด์มีแนวโน้มที่จะเกิดปฏิกิริยาเคมีมากกว่าและกิจกรรมของพวกมันจะฟื้นตัวได้ยาก สารตัวกลางที่เกิดขึ้นระหว่างกระบวนการสูญเสียสภาพธรรมชาติมีความสามารถในการละลายต่ำและมีแนวโน้มที่จะรวมตัวและการตกตะกอน
การเก็บรักษา:
สภาพการเก็บรักษาที่ดีที่สุด: โดยทั่วไปเปปไทด์จะถูกจัดเก็บในรูปของผงฟรีซดราย ซึ่งมีความเสถียรมากที่ -20 องศา โดยเฉพาะอย่างยิ่งหลังจากการทำแห้งแบบเยือกแข็ง และเก็บไว้ในเครื่องอบแห้ง -20 องศา เปปไทด์ส่วนใหญ่สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมินี้ได้หลายปีโดยไม่มีการเปลี่ยนแปลง เพื่อลดผลกระทบของความชื้น ควรทำให้เปปไทด์แห้งแบบเยือกแข็งกลับคืนสู่อุณหภูมิห้องภายใต้สภาวะแห้งก่อนที่จะสัมผัสกับอากาศ
บรรจุภัณฑ์: เทคโนโลยีชีวภาพ Hesheng แนะนำบรรจุภัณฑ์ขนาดเล็กเพื่อหลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ ลดจำนวนการเปิดและปิดภาชนะ จึงช่วยลดโอกาสในการจัดการที่ไม่เหมาะสมหรือการปนเปื้อนของแบคทีเรีย และรับประกันความเสถียรของเปปไทด์
การทดสอบความบริสุทธิ์:
รับประกันความบริสุทธิ์: เปปไทด์ที่จัดส่งทั้งหมดมีความบริสุทธิ์ตามที่กำหนด และเปปไทด์ที่ไม่ตรงตามมาตรฐานจะถูกทิ้ง ผลการตรวจจับ HPLC และ MS สามารถตรวจสอบความบริสุทธิ์และน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์ ในขณะที่แสดงสิ่งเจือปนหลัก
วิธีการตรวจจับอื่นๆ เช่น การวิเคราะห์กรดอะมิโนหรือการวิเคราะห์องค์ประกอบ สามารถยืนยันองค์ประกอบของกรดอะมิโนของเปปไทด์เป็นวิธีการเสริมในการยืนยันเปปไทด์
เทคโนโลยีการสังเคราะห์:
การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสโซลิด: การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสโซลิดไม่จำเป็นต้องทำให้ผลิตภัณฑ์ระดับกลางบริสุทธิ์ ทำให้สามารถสังเคราะห์กระบวนการต่อเนื่องได้ และวางรากฐานสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์อัตโนมัติ จากการสังเคราะห์ทางเคมีของ Fmoc เปปไทด์เป้าหมายถูกสังเคราะห์โดยการเชื่อมโยงกลุ่มคาร์บอกซิลของกรดอะมิโนที่ปลาย C ด้วยโควาเลนต์กับเรซินโพลีเมอร์ที่ไม่ละลายน้ำ จากนั้นเริ่มต้นจากกลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโน
เนื้อหาข้างต้นสรุปปัญหาทั่วไปและมาตรการรับมือในการสังเคราะห์เปปไทด์ ครอบคลุมหลายแง่มุม เช่น ความเสถียรทางเคมี ความเสถียรทางกายภาพ สภาวะการเก็บรักษา การทดสอบความบริสุทธิ์ ฯลฯ