Peptide Active Pharmaceutical Ingredients (APIs) มีบทบาทสำคัญในการแพทย์สมัยใหม่นำเสนอตัวเลือกการรักษาที่ตรงเป้าหมายและมีประสิทธิภาพสำหรับโรคที่หลากหลาย ในฐานะผู้จัดหา Peptide APIs ชั้นนำเราเข้าใจถึงความสำคัญของการผลิตเปปไทด์คุณภาพสูงที่ตรงตามมาตรฐานการกำกับดูแลที่เข้มงวดที่สุด หนึ่งในขั้นตอนสำคัญในการผลิต Peptide API คือการทำให้บริสุทธิ์ซึ่งทำให้มั่นใจได้ว่าการกำจัดสิ่งสกปรกและสารปนเปื้อนเพื่อให้ได้ระดับความบริสุทธิ์และคุณภาพที่ต้องการ ในโพสต์บล็อกนี้เราจะหารือเกี่ยวกับขั้นตอนที่เกี่ยวข้องในการทำให้บริสุทธิ์ของ Peptide API
ขั้นตอนที่ 1: การสังเคราะห์เปปไทด์ดิบ
ขั้นตอนแรกในการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ API คือการสังเคราะห์เปปไทด์ดิบ โดยทั่วไปจะทำโดยใช้การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง (SPPS) ซึ่งเป็นวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการสังเคราะห์ทางเคมีของเปปไทด์ ใน SPPS เปปไทด์จะถูกสร้างขึ้นหนึ่งกรดอะมิโนในแต่ละครั้งด้วยการรองรับที่มั่นคงมักจะเป็นเรซิน กรดอะมิโนได้รับการปกป้องด้วยกลุ่มเฉพาะเพื่อป้องกันปฏิกิริยาที่ไม่พึงประสงค์ในระหว่างกระบวนการสังเคราะห์ เมื่อประกอบไปด้วยเปปไทด์โซ่มันจะถูกแยกออกจากเรซินและ deprotected เพื่อให้ได้เปปไทด์ดิบ
ขั้นตอนที่ 2: การกรองเบื้องต้น
หลังจากการสังเคราะห์เปปไทด์ดิบส่วนผสมของปฏิกิริยาจะมีเปปไทด์ที่ต้องการเช่นเดียวกับสิ่งสกปรกต่าง ๆ เช่นกรดอะมิโนที่ไม่ทำปฏิกิริยา, รีเอเจนต์คัปปลิ้งและชิ้นส่วนเรซิน ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ครั้งแรกคือการกำจัดอนุภาคขนาดใหญ่และสิ่งสกปรกที่ไม่ละลายน้ำผ่านการกรอง กระบวนการกรองอย่างง่ายโดยใช้กระดาษกรองหรือตัวกรองเมมเบรนสามารถกำจัดอนุภาคที่มองเห็นได้อย่างมีประสิทธิภาพทำให้สารละลายที่ค่อนข้างชัดเจนซึ่งมีเปปไทด์ดิบ
ขั้นตอนที่ 3: การเตรียมโครมาโตกราฟี
การเตรียมโครมาโตกราฟีเป็นขั้นตอนสำคัญในการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ API มันถูกใช้เพื่อแยกเปปไทด์ที่ต้องการออกจากสิ่งเจือปนที่เหลืออยู่บนพื้นฐานของคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมีที่แตกต่างกัน มีเทคนิคการโครมาโตกราฟีหลายประเภทที่สามารถใช้สำหรับการทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์รวมถึงโครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับ (RPC), โครมาโตกราฟี (IEC) และโครมาโตกราฟี (SEC)
- โครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับ (RPC): RPC เป็นเทคนิคโครมาโตกราฟีที่ใช้กันมากที่สุดสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ มันขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาที่ไม่ชอบน้ำระหว่างเปปไทด์และเฟสคงที่ซึ่งโดยทั่วไปจะเป็นเรซินที่ไม่ชอบน้ำ สารละลายเปปไทด์ดิบถูกโหลดลงในคอลัมน์ RPC และเปปไทด์จะถูกชะออกโดยใช้การไล่ระดับสีของตัวทำละลายขั้วโลก (เช่นน้ำ) และตัวทำละลายที่ไม่ใช่ขั้ว (เช่น acetonitrile) เปปไทด์ที่มีน้ำที่แตกต่างกันจะทำให้เกิดการแยกออกจากกัน ตัวอย่างเช่นเปปไทด์เช่นSteer-glu-oea-oeu-osuสามารถทำให้บริสุทธิ์ได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยใช้ RPC
- การแลกเปลี่ยน chromatography (IEC): IEC แยกเปปไทด์ตามค่าใช้จ่ายของพวกเขา เฟสคงที่ใน IEC เป็นเรซินที่มีกลุ่มการทำงานที่มีประจุไม่ว่าจะเป็นประจุบวกหรือประจุลบ สารละลายเปปไทด์ดิบถูกโหลดลงในคอลัมน์ IEC และเปปไทด์จะถูกชะออกโดยใช้การไล่ระดับสีของบัฟเฟอร์ที่มีความแข็งแรงไอออนิกหรือค่า pH ที่แตกต่างกัน เปปไทด์ที่มีค่าใช้จ่ายที่แตกต่างกันจะผูกกับเรซินที่มีความพึงพอใจและความผิดปกติที่แตกต่างกันในเวลาที่ต่างกัน
- โครมาโตกราฟีขนาดพิเศษ (SEC): วินาทีแยกเปปไทด์ตามขนาดของพวกเขา เฟสคงที่ใน SEC เป็นเรซินที่มีรูพรุนและเปปไทด์จะถูกแยกออกจากกันตามความสามารถในการเข้าสู่รูขุมขนของเรซิ่น เปปไทด์ขนาดใหญ่จะชะลอตัวลงก่อนตามด้วยเปปไทด์ขนาดเล็ก SEC มักใช้เป็นขั้นตอนการขัดหลังจาก RPC หรือ IEC เพื่อลบมวลรวมที่เหลืออยู่หรือสิ่งสกปรกที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ
ขั้นตอนที่ 4: แยกออกจากกัน
หลังจากการเตรียมโครมาโตกราฟีเศษส่วนเปปไทด์บริสุทธิ์อาจมีเกลือและโมเลกุลขนาดเล็กอื่น ๆ จากบัฟเฟอร์โครมาโตกราฟี การแยกออกจากกันเป็นกระบวนการกำจัดเกลือเหล่านี้เพื่อให้ได้สารละลายเปปไทด์บริสุทธิ์ วิธีการทั่วไปหนึ่งสำหรับการแยกออกจากกันคือการล้างไตซึ่งสารละลายเปปไทด์จะถูกวางไว้ในถุงล้างไตที่มีเยื่อหุ้มกึ่งซึมผ่านและ dialyzed กับบัฟเฟอร์ที่มีความเข้มข้นของเกลือต่ำ อีกวิธีหนึ่งคือการกรองเจลโครมาโตกราฟีซึ่งสามารถแยกเปปไทด์ออกจากเกลือตามความแตกต่างของขนาด
ขั้นตอนที่ 5: lyophilization
Lyophilization หรือที่เรียกว่าการอบแห้งแบบแข็งเป็นขั้นตอนสุดท้ายในกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ มันเกี่ยวข้องกับการแช่แข็งสารละลายเปปไทด์บริสุทธิ์จากนั้นนำน้ำออกโดยการระเหิดภายใต้สุญญากาศ Lyophilization ไม่เพียง แต่กำจัดน้ำออกจากสารละลายเปปไทด์ แต่ยังทำให้เปปไทด์คงที่โดยการป้องกันการย่อยสลายและการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ เปปไทด์ lyophilized ที่เกิดขึ้นเป็นผงแห้งที่สามารถเก็บและขนส่งได้อย่างง่ายดาย
ขั้นตอนที่ 6: การควบคุมคุณภาพ
การควบคุมคุณภาพเป็นส่วนสำคัญของกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ API หลังจากการทำให้บริสุทธิ์และ lyophilization เปปไทด์จะถูกวิเคราะห์โดยใช้เทคนิคการวิเคราะห์ต่าง ๆ เพื่อให้แน่ใจว่ามีความบริสุทธิ์เอกลักษณ์และคุณภาพ เทคนิคการวิเคราะห์ทั่วไปที่ใช้สำหรับการควบคุมคุณภาพเปปไทด์ ได้แก่ โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC), มวลสารสเปกโตรเมตรี (MS), เรโซแนนซ์แม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) และการวิเคราะห์กรดอะมิโน
- โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC): HPLC ใช้เพื่อกำหนดความบริสุทธิ์ของเปปไทด์โดยการแยกเปปไทด์ออกจากสิ่งสกปรกที่เหลืออยู่และการหาปริมาณจำนวนของพวกเขา เปปไทด์ที่บริสุทธิ์ควรมีจุดสูงสุดที่คมชัดเดียวบน HPLC chromatogram ซึ่งบ่งบอกถึงความบริสุทธิ์ในระดับสูง
- มวลสาร (MS): MS ใช้เพื่อยืนยันตัวตนของเปปไทด์โดยการกำหนดน้ำหนักโมเลกุล น้ำหนักโมเลกุลที่วัดได้ของเปปไทด์ควรตรงกับน้ำหนักโมเลกุลเชิงทฤษฎีที่คำนวณจากลำดับกรดอะมิโน
- เรโซแนนซ์แม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR): NMR ใช้เพื่อกำหนดโครงสร้างและโครงสร้างของเปปไทด์ มันสามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับสภาพแวดล้อมทางเคมีของกรดอะมิโนตกค้างในเปปไทด์และช่วยยืนยันตัวตนของมัน
- การวิเคราะห์กรดอะมิโน: การวิเคราะห์กรดอะมิโนใช้เพื่อกำหนดองค์ประกอบของกรดอะมิโนของเปปไทด์ องค์ประกอบของกรดอะมิโนที่วัดได้ควรตรงกับองค์ประกอบที่คาดหวังตามลำดับเปปไทด์
ขั้นตอนที่ 7: บรรจุภัณฑ์และที่เก็บข้อมูล
เมื่อ Peptide API ผ่านการทดสอบการควบคุมคุณภาพแล้วก็พร้อมสำหรับบรรจุภัณฑ์และการจัดเก็บ เปปไทด์มักจะบรรจุในขวดที่ผ่านการฆ่าเชื้อหรือแอมป์ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจนหรืออาร์กอนเพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันและการย่อยสลาย วัสดุบรรจุภัณฑ์ควรได้รับการคัดเลือกให้เข้ากันได้กับเปปไทด์และให้อุปสรรคที่ดีต่อความชื้นออกซิเจนและแสง เงื่อนไขการจัดเก็บสำหรับเปปไทด์ API ขึ้นอยู่กับความมั่นคงและควรควบคุมอย่างรอบคอบเพื่อให้แน่ใจว่าคุณภาพระยะยาว
ในฐานะซัพพลายเออร์ Peptide APIs เรามุ่งมั่นที่จะให้ลูกค้าของเราด้วย APIs เปปไทด์คุณภาพสูงที่ตรงตามข้อกำหนดเฉพาะของพวกเขา สิ่งอำนวยความสะดวกการทำให้บริสุทธิ์ที่ทันสมัยของเราและทีมนักวิทยาศาสตร์ที่มีประสบการณ์ทำให้มั่นใจได้ว่า API เปปไทด์ทุกชุดจะถูกทำให้บริสุทธิ์ตามมาตรฐานสูงสุด หากคุณสนใจซื้อ APIs เปปไทด์เช่นPalmitoyl -Glu (OSU) -OTBUหรือfmoc-ser (tbu) -aib-ohโปรดติดต่อเราสำหรับข้อมูลเพิ่มเติมและเพื่อหารือเกี่ยวกับความต้องการเฉพาะของคุณ เราหวังว่าจะได้ทำงานร่วมกับคุณเพื่อจัดหาโซลูชั่น Peptide API ที่ดีที่สุดสำหรับการวิจัยและพัฒนายาของคุณ
การอ้างอิง
- Alberts, B. , Johnson, A. , Lewis, J. , Raff, M. , Roberts, K. , & Walter, P. (2002) ชีววิทยาโมเลกุลของเซลล์ วิทยาศาสตร์การ์แลนด์
- Jones, J. (1991) การสังเคราะห์กรดอะมิโนและเปปไทด์ สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยออกซ์ฟอร์ด
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010) การพัฒนาวิธีการ HPLC ในทางปฏิบัติ John Wiley & Sons