ในขอบเขตของการวิจัยและพัฒนาเปปไทด์ความบริสุทธิ์ของแคตตาล็อกเปปไทด์มีความสำคัญสูงสุด ในฐานะผู้จัดหาแคตตาล็อกเปปไทด์โดยเฉพาะเราเข้าใจถึงความสำคัญของการจัดหาผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสูงให้กับลูกค้าของเรา บางครั้งแม้จะมีความพยายามอย่างเต็มที่ในการสังเคราะห์และกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ แต่ก็อาจจำเป็นต้องมีการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์แคตตาล็อกต่อไป ในบล็อกนี้เราจะสำรวจวิธีการต่าง ๆ และการพิจารณาสำหรับเปปไทด์แคตตาล็อกที่บริสุทธิ์ต่อไปเมื่อจำเป็น
ทำไมต้องทำให้บริสุทธิ์ต่อไป?
มีสาเหตุหลายประการที่ทำให้การชำระล้างเปปไทด์แคตตาล็อกเพิ่มเติมอาจมีความจำเป็น ประการแรกในแอปพลิเคชันการวิจัยที่มีความไวสูงเช่นการทดสอบในเซลล์การศึกษาในร่างกายหรือการวิจัยทางชีววิทยาเชิงโครงสร้างแม้กระทั่งการติดตามปริมาณสิ่งสกปรกอาจมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อผลการทดลอง สิ่งสกปรกอาจรบกวนกิจกรรมทางชีวภาพของเปปไทด์ซึ่งนำไปสู่ผลบวกหรือเชิงลบที่ผิดพลาด
ประการที่สองข้อกำหนดด้านกฎระเบียบในบางอุตสาหกรรมเช่นยาต้องการความบริสุทธิ์ในระดับสูงมากสำหรับเปปไทด์ที่ใช้ในการพัฒนายา หากเปปไทด์ถูกพิจารณาว่าเป็นตัวแทนการรักษาที่มีศักยภาพสิ่งสกปรกใด ๆ อาจมีความเสี่ยงต่อความปลอดภัยของผู้ป่วยและขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมเป็นสิ่งจำเป็น
วิธีโครมาโตกราฟี
ย้อนกลับ - เฟสสูง - ประสิทธิภาพของเหลวของเหลว (RP - HPLC)
RP - HPLC เป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดสำหรับการทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์ มันแยกเปปไทด์ขึ้นอยู่กับความไม่ชอบน้ำ เฟสคงที่ใน RP - HPLC เป็นวัสดุที่ไม่ชอบน้ำซึ่งโดยทั่วไปจะเป็นคอลัมน์ที่ใช้ซิลิกาที่มีโซ่อัลคิลที่แนบมา (เช่น C18 หรือ C8) เปปไทด์ที่มีน้ำที่แตกต่างกันจะมีปฏิสัมพันธ์ที่แตกต่างกับเฟสคงที่ส่งผลให้เวลาการเก็บรักษาแตกต่างกัน
ในการชำระล้างเปปไทด์แคตตาล็อกเพิ่มเติมโดยใช้ RP - HPLC เราต้องเลือกเฟสมือถือที่เหมาะสมก่อน เฟสเคลื่อนที่ทั่วไปประกอบด้วยส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์เช่น acetonitrile หรือเมทานอลด้วยการเติมกรดจำนวนเล็กน้อย (เช่นกรด trifluoroacetic, TFA) เพื่อปรับปรุงรูปร่างสูงสุด ด้วยการปรับการไล่ระดับสีของตัวทำละลายอินทรีย์เราสามารถเพิ่มประสิทธิภาพการแยกเปปไทด์เป้าหมายออกจากสิ่งสกปรก
ตัวอย่างเช่นหากเรามีเปปไทด์แคตตาล็อกเช่นLL-37, เปปไทด์ต้านจุลชีพซึ่งเป็นเปปไทด์ต้านจุลชีพที่มีการใช้งานการรักษาที่มีศักยภาพ RP - HPLC สามารถใช้ในการลบการสังเคราะห์ที่เหลืออยู่โดยผลิตภัณฑ์หรือชิ้นส่วนที่เสื่อมโทรม สามารถใช้ LL - 37 ที่บริสุทธิ์ในการตรวจกิจกรรมต้านจุลชีพที่แม่นยำยิ่งขึ้น
ไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี
ไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟีแยกเปปไทด์ตามค่าใช้จ่ายของพวกเขา มีสองประเภทหลัก: ไอออนบวก - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี (CEX) และประจุลบ - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี (AEX) ใน CEX เฟสคงที่มีกลุ่มที่มีค่าใช้จ่ายในเชิงลบและเปปไทด์ที่มีประจุบวกสุทธิจะผูกกับมัน ใน AEX เฟสคงที่จะถูกเรียกเก็บเงินในเชิงบวกและเปปไทด์ที่มีประจุลบจะถูกเก็บไว้
ตัวเลือกระหว่าง CEX และ AEX ขึ้นอยู่กับจุดไอโซอิเล็กทริก (PI) ของเปปไทด์ หาก PI ของเปปไทด์ต่ำกว่าค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่เปปไทด์จะมีประจุลบสุทธิและสามารถใช้ AEX ได้ ในทางกลับกันหาก PI อยู่เหนือค่า pH ของเฟสมือถือ CEX นั้นเหมาะสมกว่า
ตัวอย่างเช่นUreistachykinin II, เปปไทด์ที่มีโปรไฟล์การชาร์จเฉพาะสามารถทำให้บริสุทธิ์ต่อไปโดยใช้ไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี ด้วยการเลือกค่า pH เฟสมือถือและความแข็งแรงของไอออนิกอย่างระมัดระวังเราสามารถแยกเปปไทด์เป้าหมายออกจากสิ่งสกปรกที่มีประจุอื่น ๆ ได้ดี
วิธีการอิเล็กโทรฟอเรติก
โซเดียม Dodecyl Sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis (SDS - หน้า)
แม้ว่าหน้า SDS - ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการวิเคราะห์โปรตีน แต่ก็สามารถนำไปใช้กับการทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์ในระดับหนึ่ง ใน SDS - หน้าเปปไทด์จะถูกทำลายโดย SDS และแยกออกจากน้ำหนักโมเลกุล เปปไทด์อพยพผ่านเจลโพลีอะคริลาไมด์ภายใต้อิทธิพลของสนามไฟฟ้า
หลังจากอิเล็กโทรโฟเรซิสเจลสามารถย้อมสีเพื่อให้เห็นภาพเปปไทด์ วงดนตรีที่สอดคล้องกับเปปไทด์เป้าหมายนั้นสามารถตัดออกจากเจลและเปปไทด์สามารถชะลอจากเมทริกซ์เจล อย่างไรก็ตามวิธีนี้มีข้อ จำกัด บางประการ กระบวนการชะล้างอาจซับซ้อนและอาจมีการสูญเสียเปปไทด์ในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์ นอกจากนี้ SDS อาจเป็นเรื่องยากที่จะลบออกจากเปปไทด์บริสุทธิ์
เส้นเลือดฝอย electrophoresis (CE)
เส้นเลือดฝอย electrophoresis เป็นเทคนิคการแยกที่ทรงพลังสำหรับเปปไทด์ มันมีประสิทธิภาพการแยกสูงเวลาวิเคราะห์สั้นและการบริโภคตัวอย่างต่ำ CE แยกเปปไทด์ตามค่าใช้จ่าย - ต่อ - อัตราส่วนมวล มีโหมดที่แตกต่างกันของ CE เช่นโซนอิเล็กโทรโฟเรซิส (CZE), เส้นเลือดฝอยเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส (CGE) และโครมาโตกราฟีอิเล็กโทรนิกส์ไมเซลลาร์ (MEKC)
CZE เป็นโหมดที่ใช้กันมากที่สุดสำหรับการวิเคราะห์เปปไทด์และการทำให้บริสุทธิ์ ใน CZE เปปไทด์จะถูกแยกออกเป็นบัฟเฟอร์ - เส้นเลือดฝอยที่เต็มไปด้วยสนามไฟฟ้า การแยกจะขึ้นอยู่กับความแตกต่างในการเคลื่อนย้ายอิเล็กโทรฟอเรติกของเปปไทด์ CE สามารถควบคู่ไปกับวิธีการตรวจจับที่หลากหลายเช่นการดูดซับรังสียูวีการเรืองแสงและสเปกโตรเมตรีมวลเพื่อปรับปรุงความแม่นยำของการระบุเปปไทด์และการทำให้บริสุทธิ์
ข้อพิจารณาอื่น ๆ
ความสามารถในการละลาย
ความสามารถในการละลายของเปปไทด์เป็นปัจจัยสำคัญในกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ หากเปปไทด์มีความสามารถในการละลายที่ไม่ดีในตัวทำละลายทำให้บริสุทธิ์มันสามารถนำไปสู่การตกตะกอนในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์ซึ่งจะส่งผลต่อการฟื้นตัวและความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ เพื่อปรับปรุงความสามารถในการละลายของเปปไทด์เราสามารถปรับค่า pH ของตัวทำละลายเพิ่มตัวทำละลายร่วมหรือใช้สารละลายเฉพาะ
การวิเคราะห์ความบริสุทธิ์
หลังจากการทำให้บริสุทธิ์ต่อไปมันเป็นสิ่งสำคัญในการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ วิธีการทั่วไปสำหรับการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์รวมถึงโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC), แมสสเปกโตรเมตรี (MS) และเรโซแนนซ์แม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) HPLC สามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับความบริสุทธิ์ของโครมาโตกราฟีของเปปไทด์ในขณะที่ MS สามารถยืนยันน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์และตรวจจับสิ่งสกปรกใด ๆ ที่มีมวลต่างกัน NMR สามารถใช้เพื่อกำหนดโครงสร้างและความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ในระดับอะตอม
บทสรุป
ในฐานะผู้จัดหาแคตตาล็อกเปปไทด์เรามุ่งมั่นที่จะจัดหาเปปไทด์ที่มีคุณภาพสูงให้กับลูกค้าของเรา เมื่อต้องการการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์แคตตาล็อกต่อไปเรามีวิธีการที่หลากหลายในการกำจัดของเรารวมถึงวิธีการโครมาโตกราฟีวิธีการอิเล็กโทรฟอเรติกและการพิจารณาอื่น ๆ เช่นการละลายและการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ โดยการเลือกวิธีการทำให้บริสุทธิ์ที่เหมาะสมอย่างระมัดระวังและปรับสภาพการทำให้บริสุทธิ์ให้เหมาะสมเราสามารถมั่นใจได้ว่าเปปไทด์เป็นไปตามข้อกำหนดด้านความบริสุทธิ์ที่สูงของลูกค้าของเรา
หากคุณมีความต้องการสำหรับแคตตาล็อกเปปไทด์หรือต้องการบริการการทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมโปรดติดต่อเราเพื่อรับการจัดซื้อและอภิปราย เราหวังว่าจะได้ทำงานร่วมกับคุณเพื่อตอบสนองความต้องการด้านการวิจัยและพัฒนาเปปไทด์ของคุณ
การอ้างอิง
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2010) ความรู้เบื้องต้นเกี่ยวกับโครมาโตกราฟีของเหลวที่ทันสมัย ไวลีย์
- Jorgenson, JW, & Lukacs, KD (1981) อิเล็กโทรโฟเรซิสโซนเส้นเลือดฝอย เคมีวิเคราะห์, 53 (8), 1298 - 1302
- Laemmli, สหราชอาณาจักร (1970) ความแตกแยกของโปรตีนโครงสร้างในระหว่างการประกอบหัวของแบคทีเรีย Bacteriophage T4 ธรรมชาติ, 227 (5259), 680 - 685