วิธีละลายเปปไทด์แคตตาล็อก?

การละลายเปปไทด์แคตตาล็อกเป็นขั้นตอนสำคัญในการทดลองทางชีวเคมีและชีวฟิสิกส์จำนวนมาก ในฐานะซัพพลายเออร์ของเปปไทด์แคตตาล็อกที่มีคุณภาพสูงเราเข้าใจถึงความท้าทายและความสำคัญของการสลายตัวของเปปไทด์ที่เหมาะสม ในบล็อกนี้เราจะสำรวจปัจจัยสำคัญและวิธีการสำหรับการละลายเปปไทด์แคตตาล็อกอย่างมีประสิทธิภาพ

ทำความเข้าใจกับลักษณะของเปปไทด์

ก่อนที่จะพยายามละลายเปปไทด์มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเข้าใจคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมี เปปไทด์อาจแตกต่างกันอย่างกว้างขวางในแง่ขององค์ประกอบของกรดอะมิโนความยาวความไม่ชอบน้ำและประจุ ลักษณะเหล่านี้มีผลต่อความสามารถในการละลายของเปปไทด์อย่างมีนัยสำคัญ

เปปไทด์ที่ไม่ชอบน้ำซึ่งมีสัดส่วนสูงของกรดอะมิโนที่ไม่ใช่ขั้วโลกเช่น leucine, isoleucine และ phenylalanine มักจะยากที่จะละลายในสารละลายน้ำ ในทางกลับกันเปปไทด์ที่ชอบน้ำที่มีกรดอะมิโนหรือกรดอะมิโนที่มีประจุเช่นไลซีนอาร์จินีนและกรดกลูตามิกมักจะละลายได้ในน้ำมากขึ้น

ตัวอย่างเช่น,osteocalcin (7 - 19) (มนุษย์)เป็นเปปไทด์ที่ค่อนข้างสั้น ความสามารถในการละลายของมันขึ้นอยู่กับกรดอะมิโนที่เหลืออยู่ หากมีจำนวนมากของสารตกค้างที่ไม่ชอบน้ำก็อาจต้องใช้ตัวทำละลายพิเศษสำหรับการสลายตัว

การเลือกตัวทำละลาย

ทางเลือกของตัวทำละลายเป็นหนึ่งในปัจจัยที่สำคัญที่สุดในการสลายตัวของเปปไทด์ นี่คือตัวทำละลายทั่วไปที่ใช้สำหรับการสลายตัวของเปปไทด์:

ตัวทำละลายน้ำ

• น้ำ: น้ำบริสุทธิ์เป็นตัวทำละลายที่ง่ายที่สุดและพบได้บ่อยที่สุดสำหรับเปปไทด์ที่ชอบน้ำ หากเปปไทด์มีประจุบวกหรือลบที่ค่า pH ทางสรีรวิทยามันมักจะละลายในน้ำได้อย่างง่ายดาย ตัวอย่างเช่นเปปไทด์ที่มีปริมาณกรดอะมิโนพื้นฐานสูง (เช่นไลซีนและอาร์จินีน) จะมีประจุบวกที่ค่า pH ที่เป็นกลางและสามารถสร้างปฏิกิริยาไอออนิกกับโมเลกุลของน้ำ
• สารละลายบัฟเฟอร์: สารละลายบัฟเฟอร์มักใช้เพื่อรักษาสภาพแวดล้อม pH ที่เฉพาะเจาะจง เปปไทด์ที่แตกต่างกันอาจมีความสามารถในการละลายที่ดีที่สุดที่ค่า pH ที่แตกต่างกัน ตัวอย่างเช่นเปปไทด์ที่เป็นกรดอาจละลายได้ดีขึ้นในบัฟเฟอร์พื้นฐานเล็กน้อยในขณะที่เปปไทด์พื้นฐานอาจละลายได้มากขึ้นในบัฟเฟอร์ที่เป็นกรด ฟอสเฟต - น้ำเกลือบัฟเฟอร์ (PBS) เป็นบัฟเฟอร์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยทางชีวภาพ มันให้ค่า pH ทางสรีรวิทยาและความแข็งแรงของไอออนิกซึ่งเหมาะสำหรับเปปไทด์จำนวนมากที่จะใช้ในการตรวจทางชีวภาพ

ตัวทำละลายอินทรีย์

• Dimethyl Sulfoxide (DMSO): DMSO เป็นตัวทำละลายอินทรีย์ที่มีขั้วสูงซึ่งสามารถละลายเปปไทด์ที่หลากหลายรวมถึงสารที่ไม่ชอบน้ำ มันมีความสามารถในการทำลายปฏิสัมพันธ์ที่ไม่เข้ากับน้ำระหว่างโมเลกุลเปปไทด์ อย่างไรก็ตาม DMSO นั้นเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีความเข้มข้นสูงดังนั้นหากเปปไทด์มีไว้สำหรับการตรวจที่ใช้เซลล์ - ความเข้มข้นของ DMSO ในการแก้ปัญหาขั้นสุดท้ายจะต้องมีการควบคุมอย่างระมัดระวัง
• acetonitrile: Acetonitrile เป็นอีกตัวทำละลายอินทรีย์ทั่วไปที่ใช้ในการละลายของเปปไทด์ มันมักจะใช้ร่วมกับน้ำในเฟสสูง - ประสิทธิภาพของเหลวประสิทธิภาพโครมาโตกราฟี (RP - HPLC) สำหรับการทำให้บริสุทธิ์และการวิเคราะห์เปปไทด์ Acetonitrile สามารถขัดขวางปฏิกิริยาที่ไม่ชอบน้ำในเปปไทด์และมีประโยชน์สำหรับการละลายเปปไทด์ที่ไม่ชอบน้ำในระดับปานกลาง

สำหรับranatensinซึ่งอาจมีบางพื้นที่ที่ไม่ชอบน้ำส่วนผสมของน้ำและ DMSO หรือ acetonitrile จำนวนเล็กน้อยอาจเป็นทางเลือกที่ดีสำหรับการสลายตัว

เทคนิคการสลายตัว

เมื่อเลือกตัวทำละลายที่เหมาะสมเทคนิคต่อไปนี้สามารถใช้ในการละลายเปปไทด์:

การผสมอ่อนโยน

การหมุนวนเบา ๆ หรือปิเปตเปปไทด์ - ส่วนผสมของตัวทำละลายสามารถช่วยกระจายอนุภาคเปปไทด์และส่งเสริมการละลาย วิธีนี้เหมาะสำหรับเปปไทด์ที่ค่อนข้างละลายได้ ตัวอย่างเช่นเปปไทด์สั้น ๆ ที่ชอบน้ำอาจละลายได้อย่างสมบูรณ์ภายในไม่กี่นาทีของการผสมอ่อนโยน

การทำเสียง

Sonication เกี่ยวข้องกับการใช้คลื่นอัลตราโซนิกกับส่วนผสมของเปปไทด์ - ตัวทำละลาย คลื่นพลังงานสูงสามารถสลายตัวของเปปไทด์และเพิ่มพื้นที่ผิวของเปปไทด์เมื่อสัมผัสกับตัวทำละลายซึ่งจะช่วยเร่งการสลายตัว อย่างไรก็ตาม sonication สามารถสร้างความร้อนซึ่งอาจทำให้เกิดการสลายตัวของเปปไทด์หรือออกซิเดชัน ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะควบคุมเวลาและอุณหภูมิ sonication ตัวอย่างเช่น sonication ควรดำเนินการในช่วงสั้น ๆ ที่มีช่วงเวลาเพื่อให้ตัวอย่างเย็นลง

ความร้อน

การให้ความร้อนสามารถเพิ่มพลังงานจลน์ของเปปไทด์และโมเลกุลของตัวทำละลายส่งเสริมการละลาย อย่างไรก็ตามวิธีนี้ควรใช้ด้วยความระมัดระวังเนื่องจากอุณหภูมิสูงสามารถทำลายเปปไทด์ได้ สำหรับเปปไทด์บางตัวความร้อนอ่อน ๆ (เช่น 37 ° C) ในช่วงเวลาสั้น ๆ อาจเพียงพอที่จะละลายโดยไม่ทำให้เกิดความเสียหายอย่างมีนัยสำคัญ

การแก้ไขปัญหา

บางครั้งแม้จะมีเทคนิคตัวทำละลายและการสลายตัวที่ถูกต้องเปปไทด์อาจยังไม่ละลายอย่างสมบูรณ์ นี่คือเหตุผลและวิธีแก้ปัญหาที่เป็นไปได้:

การรวมเปปไทด์

เปปไทด์สามารถสร้างมวลรวมได้เนื่องจากปฏิกิริยาที่ไม่ชอบน้ำปฏิกิริยาระหว่างไฟฟ้าสถิตหรือพันธะไฮโดรเจน หากสงสัยว่ามีการรวมตัวกันการเพิ่มตัวแทน chaotropic จำนวนเล็กน้อยเช่นยูเรียหรือ guanidine ไฮโดรคลอไรด์สามารถช่วยในการแยกมวลรวม อย่างไรก็ตามตัวแทนเหล่านี้อาจส่งผลกระทบต่อกิจกรรมทางชีวภาพของเปปไทด์ดังนั้นควรใช้อย่างระมัดระวัง

การเลือกตัวทำละลายที่ไม่ถูกต้อง

หากเปปไทด์ไม่ละลายในตัวทำละลายที่เลือกเริ่มต้นลองใช้ตัวทำละลายที่แตกต่างกันหรือส่วนผสมของตัวทำละลาย ตัวอย่างเช่นหากเปปไทด์ไม่ละลายน้ำในน้ำลองเพิ่ม DMSO หรือ acetonitrile จำนวนเล็กน้อยลงในน้ำ

การปนเปื้อน

การปนเปื้อนของเปปไทด์หรือตัวทำละลายอาจส่งผลกระทบต่อการสลายตัว ตรวจสอบให้แน่ใจว่าอุปกรณ์และตัวทำละลายทั้งหมดสะอาดและปราศจากสิ่งสกปรก

กรณีศึกษา:Biotinyl - polypeptide ตับอ่อน (มนุษย์)

มาดูกันเถอะBiotinyl - polypeptide ตับอ่อน (มนุษย์)เป็นตัวอย่าง เปปไทด์นี้มีกลุ่มไบโอตินติดอยู่ซึ่งอาจส่งผลต่อความสามารถในการละลาย ถ้ามันเป็นเปปไทด์ที่ชอบน้ำก็อาจละลายได้ดีในน้ำหรือสารละลายบัฟเฟอร์ อย่างไรก็ตามหากกระบวนการ biotinylation ได้แนะนำลักษณะที่ไม่ชอบน้ำบางอย่างอาจต้องใช้ตัวทำละลายอินทรีย์จำนวนเล็กน้อยเช่น DMSO สำหรับการสลายตัวที่สมบูรณ์

ก่อนอื่นเราสามารถลองละลายในน้ำโดยการผสมอย่างอ่อนโยน หากไม่ละลายอย่างสมบูรณ์เราสามารถเพิ่ม DMSO ในปริมาณเล็กน้อย (เช่น 1 - 5% v/v) และผสมต่อไป Sonication ยังสามารถใช้เพื่อช่วยกระบวนการละลาย แต่เราจำเป็นต้องตรวจสอบอุณหภูมิเพื่อป้องกันความเสียหายของเปปไทด์

บทสรุป

การละลายแคตตาล็อกเปปไทด์เป็นกระบวนการที่ซับซ้อนที่ต้องพิจารณาอย่างรอบคอบเกี่ยวกับลักษณะของเปปไทด์การเลือกตัวทำละลายและเทคนิคการสลายตัว โดยการทำความเข้าใจกับปัจจัยเหล่านี้และทำตามขั้นตอนที่เหมาะสมเราสามารถมั่นใจได้ว่าเปปไทด์จะละลายอย่างมีประสิทธิภาพและรักษากิจกรรมทางชีวภาพของพวกเขา

ในฐานะซัพพลายเออร์ชั้นนำของแคตตาล็อกเปปไทด์เรามุ่งมั่นที่จะให้บริการผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสูงและการสนับสนุนด้านเทคนิคระดับมืออาชีพ หากคุณมีคำถามใด ๆ เกี่ยวกับการสลายตัวของเปปไทด์หรือจำเป็นต้องซื้อเปปไทด์แคตตาล็อกของเราโปรดติดต่อเราสำหรับการอภิปรายเพิ่มเติม เรารอคอยที่จะได้ร่วมงานกับคุณเพื่อตอบสนองความต้องการด้านการวิจัยของคุณ

การอ้างอิง

• Alberts, B. , Johnson, A. , Lewis, J. , Raff, M. , Roberts, K. , & Walter, P. (2002) ชีววิทยาโมเลกุลของเซลล์ วิทยาศาสตร์การ์แลนด์
• Hermanson, GT (2013) เทคนิค Bioconjugate สื่อวิชาการ
• Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2010) ความรู้เบื้องต้นเกี่ยวกับโครมาโตกราฟีของเหลวที่ทันสมัย ไวลีย์