ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์มีบทบาทสำคัญในแอนติบอดี - คอนจูเกตยา (ADC) ADC เป็นกลุ่มของสารรักษาโรคที่ตรงเป้าหมายสูง ซึ่งผสมผสานความจำเพาะของโมโนโคลนอลแอนติบอดีเข้ากับความเป็นพิษต่อเซลล์ของยาที่มีโมเลกุลขนาดเล็ก ตัวเชื่อมโยงเพปไทด์ทำหน้าที่เป็นสะพานเชื่อมระหว่างแอนติบอดีและน้ำหนักบรรทุก และคุณสมบัติของมันสามารถส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อประสิทธิภาพ ความปลอดภัย และเภสัชจลนศาสตร์ของ ADC ในฐานะซัพพลายเออร์ชั้นนำของตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC ผมรู้สึกตื่นเต้นที่จะแบ่งปันกับคุณเกี่ยวกับกระบวนการสังเคราะห์ส่วนประกอบที่สำคัญเหล่านี้
การทำความเข้าใจพื้นฐานของการสังเคราะห์เปปไทด์ลิงเกอร์สำหรับ ADC
ก่อนที่จะเจาะลึกกระบวนการสังเคราะห์ จำเป็นต้องเข้าใจข้อกำหนดหลักของตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์ที่ดีควรมีความเสถียรในกระแสเลือดเพื่อป้องกันการปล่อยน้ำหนักบรรทุกก่อนเวลาอันควร แต่สามารถแยกออกที่บริเวณเป้าหมายได้เพื่อให้แน่ใจว่ามีการนำส่งยาอย่างมีประสิทธิผล นอกจากนี้ควรเข้ากันได้ทางชีวภาพและไม่ก่อให้เกิดการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ไม่พึงประสงค์
โดยทั่วไปการสังเคราะห์ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง (SPPS) ซึ่งเป็นวิธีการที่กำหนดไว้อย่างดีสำหรับการสร้างเปปไทด์ SPPS ช่วยให้สามารถเติมกรดอะมิโนทีละขั้นตอนเพื่อรองรับของแข็ง ช่วยให้สามารถควบคุมลำดับเปปไทด์ได้อย่างแม่นยำ
การสังเคราะห์เปปไทด์แบบโซลิด - เฟส (SPPS)
1. การเลือกเรซิน
ขั้นตอนแรกใน SPPS คือการเลือกเรซินที่เหมาะสม เรซินทำหน้าที่เป็นตัวรองรับที่มั่นคงสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์ มีเรซินหลายประเภทให้เลือก เช่น เรซิน Wang, เรซิน Rink amide เป็นต้น การเลือกเรซินขึ้นอยู่กับปลาย C ของเปปไทด์ที่ต้องการ ตัวอย่างเช่น หากต้องการกลุ่มกรดคาร์บอกซิลิกอิสระที่ปลาย C เรซิน Wang ก็เป็นตัวเลือกที่เหมาะสม
2. การกระตุ้นกรดอะมิโน
กรดอะมิโนที่ใช้ใน SPPS มักจะได้รับการปกป้องที่กลุ่มฟังก์ชันอะมิโนและสายโซ่ด้านข้างเพื่อป้องกันปฏิกิริยาที่ไม่พึงประสงค์ หมู่ป้องกันที่พบบ่อยที่สุดสำหรับหมู่อะมิโนคือหมู่ 9 - ฟลูออเรนิลเมทิลออกซีคาร์บอนิล (Fmoc) ก่อนที่จะเชื่อมต่อ จะต้องกำจัดกลุ่ม Fmoc ออกโดยใช้ฐาน ซึ่งโดยทั่วไปคือพิเพอริดีน จากนั้นกรดอะมิโนที่ถูกกระตุ้นจะถูกเติมลงในสายเปปไทด์ที่จับกับเรซิน การกระตุ้นโดยปกติทำได้โดยการใช้รีเอเจนต์การควบคู่ เช่น N,N' - ไดไอโซโพรพิลคาร์โบไดอิไมด์ (DIC) และ 1 - ไฮดรอกซีเบนโซไตรอาโซล (HOBt)
3. ปฏิกิริยาการมีเพศสัมพันธ์
กรดอะมิโนที่เปิดใช้งานจะเชื่อมต่อกับสายโซ่เปปไทด์ที่กำลังเติบโตบนเรซิน โดยทั่วไปปฏิกิริยานี้จะดำเนินการในตัวทำละลายอินทรีย์ เช่น N,N - ไดเมทิลฟอร์มาไมด์ (DMF) เวลาและอุณหภูมิของปฏิกิริยาคัปปลิ้งจำเป็นต้องได้รับการควบคุมอย่างระมัดระวังเพื่อให้มั่นใจถึงประสิทธิภาพคัปปลิ้งสูง หลังจากเชื่อมต่อแล้ว เรซินจะถูกล้างเพื่อกำจัดรีเอเจนต์ที่ไม่ทำปฏิกิริยาออก
4. การปลดการป้องกันและความแตกแยก
เมื่อลำดับเปปไทด์ที่ต้องการถูกประกอบเข้าด้วยกัน จะต้องถอดกลุ่มป้องกันบนโซ่ด้านข้างออก โดยปกติจะทำโดยใช้กรดผสม เช่น กรดไตรฟลูออโรอะซิติก (TFA) หลังจากการปลดการป้องกัน เปปไทด์จะถูกแยกออกจากเรซินโดยใช้ส่วนผสมของกรดเดียวกัน จากนั้นเปปไทด์ดิบจะถูกทำให้บริสุทธิ์โดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)
การออกแบบตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับการใช้งานเฉพาะ
การออกแบบตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC ไม่ใช่แนวทางขนาดเดียวที่เหมาะกับทุกแนวทาง แอปพลิเคชันที่แตกต่างกันอาจต้องการคุณสมบัติตัวเชื่อมโยงที่แตกต่างกัน ตัวอย่างเช่น สำหรับ ADC ที่จำเพาะต่อเนื้องอก ตัวเชื่อมโยงที่สามารถตัดแยกได้โดยโปรตีเอสที่เกี่ยวข้องกับเนื้องอก เช่น คาเทซิน มักจะเป็นที่พึงประสงค์
ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์ประเภทหนึ่งที่ได้รับความนิยมคือตัวเชื่อมโยง Val - Cit ที่Fmoc - วาล - ซิตี้ - PAB - OHเป็นตัวอย่างที่รู้จักกันดี ตัวเชื่อมโยงนี้มีลำดับวาลีน - ซิทรูลีนไดเปปไทด์ ซึ่งสามารถแยกออกได้โดยคาเทซิน กลุ่ม PAB (p - aminobenzyl) ใช้เพื่อเชื่อมต่อเปปไทด์กับน้ำหนักบรรทุก
รวมการปรับเปลี่ยน Linker
นอกจากลำดับเปปไทด์พื้นฐานแล้ว ตัวเชื่อมโยงยังสามารถปรับเปลี่ยนเพื่อเพิ่มคุณสมบัติของพวกมันได้ ตัวอย่างเช่น, โพลีเอทิลีนไกลคอล (PEG) สามารถถูกรวมเข้าไว้ในตัวเชื่อมโยงเพื่อปรับปรุงความสามารถในการละลายและเภสัชจลนศาสตร์ของมัน ที่DBCO - PEG4 - กรดคือตัวเชื่อมโยงที่ได้รับการดัดแปลงซึ่งมีหมู่ไดเบนโซไซโคล็อกไทน์ (DBCO) สำหรับเคมีคลิกและตัวเว้นระยะ PEG4 สิ่งนี้ยอมให้เกิดการควบคู่ที่มีประสิทธิผลของตัวเชื่อมโยงกับแอนติบอดีและน้ำหนักบรรทุก
การปรับเปลี่ยนที่สำคัญอีกประการหนึ่งคือการเพิ่มน้ำหนักบรรทุกที่เป็นพิษต่อเซลล์ ตัวอย่างเช่น,อะเซทิลีน - ตัวเชื่อมโยง - Val - Cit - PABC - MMAEเป็นตัวเชื่อมโยง - คอนจูเกตของเพย์โหลด MMAE (โมโนเมทิลออริสแตติน E) เป็นสารเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีศักยภาพ และตัวเชื่อมโยงได้รับการออกแบบมาเพื่อปล่อยน้ำหนักบรรทุกที่ตำแหน่งเป้าหมาย
การควบคุมคุณภาพในการสังเคราะห์เปปไทด์ลิงเกอร์
การควบคุมคุณภาพมีความสำคัญสูงสุดในการสังเคราะห์ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC ความบริสุทธิ์ของตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สามารถส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อประสิทธิภาพของ ADC โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) มักใช้ในการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ นอกจากนี้ แมสสเปกโตรเมทรียังใช้เพื่อยืนยันน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์และเพื่อตรวจจับสิ่งเจือปนอีกด้วย
นอกจากการวิเคราะห์ทางเคมีแล้ว การตรวจทางชีววิทยายังสามารถใช้เพื่อประเมินการทำงานของตัวเชื่อมโยงเปปไทด์ได้ ตัวอย่างเช่น การสอบวิเคราะห์ที่อิงเซลล์ภายนอกร่างกายสามารถใช้เพื่อประเมินความเป็นพิษต่อเซลล์ของ ADC และการปลดปล่อยของน้ำหนักบรรทุก
ขยายขนาดการสังเคราะห์
เมื่อกระบวนการสังเคราะห์ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์ได้รับการปรับให้เหมาะสมในระดับห้องปฏิบัติการ อาจจำเป็นต้องขยายขนาดการผลิตสำหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์ การขยายขนาดจำเป็นต้องพิจารณาปัจจัยต่างๆ อย่างรอบคอบ เช่น ปริมาตรของปฏิกิริยา เวลาของปฏิกิริยา และวิธีการทำให้บริสุทธิ์ การใช้เครื่องสังเคราะห์เปปไทด์อัตโนมัติสามารถเพิ่มประสิทธิภาพการสังเคราะห์ขนาดใหญ่ได้อย่างมาก
บทสรุป
การสังเคราะห์ตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC เป็นกระบวนการที่ซับซ้อนแต่ก็คุ้มค่า ด้วยการทำความเข้าใจหลักการของการสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง การออกแบบตัวเชื่อมโยงสำหรับการใช้งานเฉพาะ และผสมผสานการดัดแปลงที่เหมาะสม เราจึงสามารถผลิตตัวเชื่อมโยงเปปไทด์คุณภาพสูงที่ตอบสนองความต้องการของการพัฒนา ADC ได้
ในฐานะซัพพลายเออร์ของตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับ ADC เรามุ่งมั่นที่จะมอบผลิตภัณฑ์คุณภาพสูงสุดและการสนับสนุนทางเทคนิคแก่ลูกค้าของเรา หากคุณสนใจที่จะซื้อตัวเชื่อมโยงเปปไทด์สำหรับการวิจัยหรือการพัฒนา ADC ของคุณ เราขอเชิญคุณติดต่อเราเพื่อขอหารือและจัดซื้อเพิ่มเติม เราหวังว่าจะได้ร่วมงานกับคุณเพื่อพัฒนาด้านการบำบัดด้วย ADC
อ้างอิง
- Ducry, L. และ Stump, B. (2010) แอนติบอดี - คอนจูเกตยา: เชื่อมโยงน้ำหนักบรรทุกที่เป็นพิษต่อเซลล์กับโมโนโคลนอลแอนติบอดี เคมีไบโอคอนจูเกต 21(1) 5 - 13
- Alley, SC, Okeley, นิวเม็กซิโก, & Senter, PD (2010) การควบคุมตำแหน่งของสิ่งที่แนบมากับยาในแอนติบอดี - คอนจูเกตยา เคมีไบโอคอนจูเกต 21(3) 449 - 461
- Shen, BQ และคณะ (2012) ตำแหน่งการควบคู่ปรับความคงตัวในร่างกายและกิจกรรมการรักษาของคอนจูเกตแอนติบอดี - ยา เทคโนโลยีชีวภาพธรรมชาติ, 30(2), 184 - 189.