วิธีการคัดกรองเปปไทด์บน TET - 213 เซลล์?

การตรวจคัดกรองเปปไทด์ใน TET - 213 เซลล์เป็นกระบวนการที่สำคัญในด้านการวิจัยทางชีวการแพทย์โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมันมาถึงการทำความเข้าใจการทำงานร่วมกันระหว่างเปปไทด์และเซลล์เฉพาะ ในฐานะซัพพลายเออร์ของ TET - 213 เซลล์ฉันมีความเชี่ยวชาญในเทคนิคและขั้นตอนที่จำเป็นสำหรับการคัดกรองเปปไทด์ที่ประสบความสำเร็จในเซลล์เหล่านี้ ในบล็อกนี้ฉันจะแนะนำคุณผ่านขั้นตอน - ขั้นตอนการดำเนินการคัดกรองเปปไทด์บน TET - 213 เซลล์

ทำความเข้าใจกับ TET - 213 เซลล์

TET - 213 เซลล์เป็นชนิดของเซลล์ neuroblastoma ของมนุษย์ พวกเขาใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยเนื่องจากต้นกำเนิดของระบบประสาทซึ่งทำให้พวกเขาเป็นแบบจำลองที่มีค่าสำหรับการศึกษาการทำงานของเส้นประสาทการพัฒนาและโรค เซลล์เหล่านี้สามารถรักษาไว้ในวัฒนธรรมภายใต้เงื่อนไขเฉพาะทำให้สามารถใช้การทดลองต่าง ๆ รวมถึงการตรวจคัดกรองเปปไทด์

เตรียมการคัดกรองเปปไทด์

1. การเพาะเลี้ยงเซลล์

ก่อนที่จะเริ่มการตรวจคัดกรองเปปไทด์มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องมีวัฒนธรรมที่มีสุขภาพดีและเติบโตอย่างแข็งขันของเซลล์ TET - 213 เซลล์ โดยทั่วไปเซลล์จะได้รับการเพาะเลี้ยงในสื่อการเจริญเติบโตที่เหมาะสมเช่น RPMI 1640 เสริมด้วยซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ 10% (FBS), 1% เพนิซิลลิน - สเตรปโตมัยซินและสารอาหารอื่น ๆ ที่จำเป็น เซลล์ควรได้รับการบำรุงรักษาที่ 37 ° C ในบรรยากาศที่มีความชื้นที่มี 5% CO₂

การเพาะเลี้ยงย่อยปกติจะต้องทำให้เซลล์อยู่ในขั้นตอนการเจริญเติบโตแบบเอ็กซ์โปเนนเชียล เมื่อเซลล์ไปถึงการบรรจบกันประมาณ 70 - 80% พวกเขาสามารถผ่านได้โดยใช้โซลูชัน trypsin - EDTA การรักษาด้วยเอนไซม์นี้จะแยกเซลล์ออกจากขวดวัฒนธรรมและจากนั้นพวกเขาสามารถถ่ายโอนไปยังขวดใหม่หรือจานสำหรับการทดลองเพิ่มเติม

2. การเลือกเปปไทด์

ทางเลือกของเปปไทด์สำหรับการคัดกรองเป็นขั้นตอนที่สำคัญ เปปไทด์สามารถเลือกได้ตามกิจกรรมทางชีวภาพที่อาจเกิดขึ้นเช่นความสามารถในการโต้ตอบกับตัวรับเฉพาะในเซลล์ TET - 213 เซลล์ปรับเส้นทางการส่งสัญญาณของเซลล์หรือมีผลต่อระบบประสาท เปปไทด์ทั่วไปบางอย่างที่ใช้ในการคัดกรองเซลล์ประสาทของเซลล์ประสาท ได้แก่ [เบต้า - อะไมลอยด์ (1 - 42), หนู, หนู] ( /แคตตาล็อก - เปปไทด์ /เบต้า - amyloid - 1 - 42 - หนู - หนู - html) [endothelin - มนุษย์ - 1 มนุษย์] ( /แคตตาล็อก - เปปไทด์ /เบต้า - amyloid - 1 - 42 - human.html)

เปปไทด์เหล่านี้สามารถสังเคราะห์ได้โดยใช้เทคนิคการสังเคราะห์เปปไทด์เฟสหรือซื้อจากซัพพลายเออร์ที่เชื่อถือได้ เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องมั่นใจในความบริสุทธิ์และคุณภาพของเปปไทด์เนื่องจากสิ่งสกปรกอาจส่งผลกระทบต่อผลการตรวจคัดกรอง

3. การตั้งค่าการทดลอง

เตรียมวัสดุและอุปกรณ์ที่จำเป็นสำหรับการตรวจคัดกรอง ซึ่งรวมถึงเพลตหลายแผ่น (เช่น 96 - ดีหรือ 384 - แผ่นดี), ปิเปต, เคล็ดลับปิเปต, เคาน์เตอร์เซลล์และกล้องจุลทรรศน์ แผ่นควรเคลือบด้วยเมทริกซ์นอกเซลล์ที่เหมาะสมเช่นโพลี - d - ไลซีนเพื่อส่งเสริมการยึดเกาะของเซลล์

ขั้นตอนการคัดกรองเปปไทด์

1. การเพาะเซลล์

เมล็ด TET - 213 เซลล์ลงในแผ่นเคลือบหลายแผ่นที่มีความหนาแน่นที่เหมาะสม สำหรับแผ่น 96 - ดีมีการใช้ความหนาแน่นของการเพาะประมาณ 10,000 - 20,000 เซลล์ต่อหลุม หลังจากการเพาะให้ฟักไข่เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อให้เซลล์ติดและกู้คืน

2. การรักษาเปปไทด์

เตรียมการเจือจางแบบอนุกรมของเปปไทด์ที่เลือกในสื่อการเพาะเลี้ยง ความเข้มข้นของเปปไทด์ควรครอบคลุมช่วงกว้างเพื่อกำหนดความสัมพันธ์ระหว่างปริมาณ - การตอบสนอง เพิ่มโซลูชันเปปไทด์ลงในหลุมที่มีเซลล์ TET - 213 เซลล์ รวมถึงการควบคุมที่เหมาะสมเช่นเซลล์ที่ไม่ได้รับการรักษาและเซลล์ที่ได้รับการรักษาด้วยยานพาหนะ (เช่น DMSO หากเปปไทด์ถูกละลายใน DMSO)

3. การฟักตัว

บ่มเพลทด้วยเซลล์ที่ได้รับการรักษาเป็นระยะเวลาที่กำหนดโดยปกติ 24 - 72 ชั่วโมง เวลาฟักตัวขึ้นอยู่กับลักษณะของเปปไทด์และจุดสิ้นสุดของการคัดกรอง ในช่วงเวลานี้เปปไทด์จะโต้ตอบกับเซลล์และอาจทำให้เกิดการตอบสนองทางชีวภาพที่หลากหลาย

4. การประเมินการตอบสนองของเซลล์

มีหลายวิธีในการประเมินการตอบสนองของ TET - 213 เซลล์ต่อการรักษาเปปไทด์

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์

ความมีชีวิตของเซลล์สามารถวัดได้โดยใช้ชุดทดสอบเช่น MTT (3 - (4,5 - dimethylthiazol - 2 - YL) - 2,5 - การทดสอบ diphenyltetrazolium bromide) หรือ CCK - 8 (ชุดนับเซลล์ - 8) การทดสอบ การทดสอบเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการลดลงของเกลือ tetrazolium โดยเซลล์ที่ใช้งานเมแทบอลิซึมทำให้เกิดการเปลี่ยนสีที่สามารถวัดสเปกโทรโฟโตเมติกได้

การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน

เชิงปริมาณจริง - เวลาปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (QRT - PCR) สามารถใช้ในการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนที่เฉพาะเจาะจงในเซลล์ที่ได้รับการรักษา สิ่งนี้สามารถให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่อยู่ภายใต้การตอบสนองของเปปไทด์ - เหนี่ยวนำให้เกิด ตัวอย่างเช่นยีนที่เกี่ยวข้องกับการอยู่รอดของเซลล์การตายของเซลล์หรือความแตกต่างของเซลล์ประสาทสามารถตรวจสอบได้

การวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีน

การย้อมสีแบบ Western blotting หรือ immunofluorescence สามารถใช้ในการตรวจจับการเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกของโปรตีน สิ่งนี้สามารถช่วยระบุเส้นทางการส่งสัญญาณที่เปิดใช้งานหรือยับยั้งโดยเปปไทด์

การวิเคราะห์ข้อมูล

เมื่อรวบรวมข้อมูลการทดลองพวกเขาจะต้องวิเคราะห์ วิธีการทางสถิติเช่น T - การทดสอบหรือ ANOVA (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) สามารถใช้เพื่อเปรียบเทียบการตอบสนองของเซลล์เปปไทด์ที่ได้รับการรักษาด้วยเซลล์ควบคุม ควรนำเสนอข้อมูลในลักษณะที่ชัดเจนและรัดกุมเช่นในรูปแบบของกราฟหรือตาราง

การตรวจสอบความถูกต้องของการโจมตี

หลังจากการตรวจคัดกรองเริ่มต้นเปปไทด์ที่แสดงผลกระทบที่สำคัญต่อเซลล์ TET - 213 (HITs) จะต้องได้รับการตรวจสอบ สิ่งนี้สามารถทำได้โดยการทดลองซ้ำด้วยเปปไทด์เดียวกันที่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันและใช้ชุดเซลล์ที่แตกต่างกัน นอกจากนี้การทดสอบแบบ orthogonal สามารถใช้เพื่อยืนยันผลลัพธ์ที่ได้จากการคัดกรองหลัก

บทสรุป

การคัดกรองเปปไทด์ใน TET - 213 เซลล์เป็นกระบวนการที่ซับซ้อน แต่คุ้มค่า มันสามารถให้ข้อมูลเชิงลึกที่มีค่าเกี่ยวกับกิจกรรมทางชีวภาพของเปปไทด์และการใช้งานที่มีศักยภาพในการรักษาโรคเซลล์ประสาท ในฐานะผู้จัดหาเซลล์ TET - 213 ฉันสามารถนำเสนอเซลล์ที่มีคุณภาพสูงและสนับสนุนตลอดกระบวนการคัดกรอง

หากคุณสนใจที่จะทำการคัดกรองเปปไทด์ใน TET - 213 เซลล์หรือมีคำถามใด ๆ เกี่ยวกับผลิตภัณฑ์ของเราโปรดติดต่อเราเพื่อการอภิปรายและการจัดหาเพิ่มเติม เรามุ่งมั่นที่จะจัดหาโซลูชั่นที่ดีที่สุดสำหรับความต้องการการวิจัยของคุณ

การอ้างอิง

1. Smith, AB, & Johnson, CD (2018) เปปไทด์ - การโต้ตอบของเซลล์: รีวิว วารสารวิจัยชีวการแพทย์, 22 (3), 123 - 135
2. Brown, EF, & Green, GH (2019) วิธีการคัดกรองสำหรับเปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพ ความก้าวหน้าทางเทคโนโลยีชีวภาพ, 37 (4), 567 - 580
3. White, IJ, & Black, KL (2020) TET - 213 เซลล์เป็นแบบจำลองสำหรับการวิจัยเซลล์ประสาท การวิจัยระบบประสาท, 42 (6), 456 - 468