จะทราบความเข้มข้นของแค็ตตาล็อกเปปไทด์ได้อย่างไร?

การกำหนดความเข้มข้นของแค็ตตาล็อกเปปไทด์เป็นขั้นตอนสำคัญสำหรับทั้งนักวิจัยและซัพพลายเออร์ในสาขาวิทยาศาสตร์เปปไทด์ ในฐานะซัพพลายเออร์แค็ตตาล็อกเปปไทด์ ฉันเข้าใจถึงความสำคัญของการกำหนดความเข้มข้นที่แม่นยำ ไม่เพียงแต่รับประกันคุณภาพและความน่าเชื่อถือของผลิตภัณฑ์ของเรา แต่ยังให้ข้อมูลที่จำเป็นสำหรับการทดลองและการใช้งานแก่ลูกค้าอีกด้วย ในบล็อกโพสต์นี้ ฉันจะแบ่งปันวิธีการทั่วไปและข้อควรพิจารณาในการกำหนดความเข้มข้นของแค็ตตาล็อกเปปไทด์

ความสำคัญของการกำหนดความเข้มข้น

ก่อนที่จะเจาะลึกวิธีการต่างๆ เรามาทำความเข้าใจกันก่อนว่าเหตุใดการกำหนดความเข้มข้นของแค็ตตาล็อกเปปไทด์จึงมีความสำคัญมาก เปปไทด์มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยต่างๆ เช่น การค้นคว้ายา ภูมิคุ้มกันวิทยา และประสาทวิทยาศาสตร์ ประสิทธิผลของการใช้งานเหล่านี้มักขึ้นอยู่กับความเข้มข้นที่แม่นยำของเปปไทด์ที่ใช้ ความเข้มข้นที่ไม่ถูกต้องอาจนำไปสู่ผลการทดลองที่ไม่สอดคล้องกัน ทรัพยากรที่สูญเปล่า และแม้กระทั่งข้อสรุปที่ไม่ถูกต้อง ดังนั้นจึงจำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์อย่างแม่นยำเพื่อให้มั่นใจถึงความสามารถในการทำซ้ำและความน่าเชื่อถือของผลการวิจัย

วิธีการทั่วไปในการกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์

1. UV - สเปกโทรสโกปีที่มองเห็นได้

UV - สเปกโทรสโกปีที่มองเห็นได้เป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันมากที่สุดในการกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์ วิธีการนี้อิงจากข้อเท็จจริงที่ว่าเปปไทด์มีกรดอะมิโนอะโรมาติก เช่น ทริปโตเฟน ไทโรซีน และฟีนิลอะลานีน ซึ่งดูดซับแสงในบริเวณอัลตราไวโอเลต การดูดกลืนแสงของสารละลายเปปไทด์ที่ความยาวคลื่นเฉพาะ (ปกติคือ 280 นาโนเมตร) จะเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของสารละลายนั้น

หากต้องการใช้สเปกโทรสโกปีแบบมองเห็นด้วยรังสียูวี คุณต้องเตรียมสารละลายเปปไทด์ที่มีความบริสุทธิ์ที่ทราบก่อน จากนั้น วัดการดูดกลืนแสงของสารละลายที่ 280 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ ความเข้มข้นของเปปไทด์สามารถคำนวณได้โดยใช้กฎเบียร์ - แลมเบิร์ต:

[A=\varepsilon cl]

โดยที่ (A) คือค่าการดูดกลืนแสง (\varepsilon) คือค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของฟันกราม (c) คือความเข้มข้น และ (l) คือความยาวเส้นทางของคิวเวตต์ ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียฟันกรามของเปปไทด์สามารถคำนวณได้ตามลำดับกรดอะมิโน

อย่างไรก็ตาม ควรสังเกตว่าวิธีนี้มีข้อจำกัดบางประการ เช่น ถ้าเปปไทด์ไม่มีกรดอะมิโนอะโรมาติก หรือมีสารอื่นในสารละลายที่ดูดซับที่ 280 นาโนเมตร ผลลัพธ์ที่ได้ก็อาจคลาดเคลื่อนได้

2. การวิเคราะห์กรดอะมิโน

การวิเคราะห์กรดอะมิโนเป็นวิธีที่แม่นยำยิ่งขึ้นในการพิจารณาความเข้มข้นของเปปไทด์ วิธีการนี้เกี่ยวข้องกับการไฮโดรไลซ์เปปไทด์ให้เป็นกรดอะมิโนที่เป็นส่วนประกอบของมัน และจากนั้นหาปริมาณกรดอะมิโนแต่ละตัวโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) หรือเทคนิคการวิเคราะห์อื่นๆ

เพื่อทำการวิเคราะห์กรดอะมิโน เปปไทด์จะถูกไฮโดรไลซ์ในสารละลายที่เป็นกรดหรือเบสก่อน จากนั้น กรดอะมิโนที่ได้จะถูกแยกและหาปริมาณ ความเข้มข้นของเปปไทด์สามารถคำนวณได้จากปริมาณของกรดอะมิโนจำเพาะในเปปไทด์และปริมาณสัมพันธ์ที่ทราบ

การวิเคราะห์กรดอะมิโนให้ผลลัพธ์ที่แม่นยำกว่าสเปกโทรสโกปีแบบมองเห็นด้วยรังสี UV โดยเฉพาะเปปไทด์ที่ไม่มีกรดอะมิโนอะโรมาติก อย่างไรก็ตาม วิธีนี้ใช้เวลานานกว่าและมีราคาแพงกว่า

3. การทดสอบแบรดฟอร์ด

การทดสอบแบบแบรดฟอร์ดเป็นวิธีการวัดสีเพื่อกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนและเปปไทด์ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการจับกันของสีย้อม Coomassie Brilliant Blue G - 250 กับโปรตีนและเปปไทด์ เมื่อสีย้อมจับกับเปปไทด์ สีของสารละลายจะเปลี่ยนจากสีน้ำตาลเป็นสีน้ำเงิน และสามารถวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 595 นาโนเมตรได้

ในการดำเนินการทดสอบแบบแบรดฟอร์ด ขั้นแรกให้เตรียมเส้นโค้งมาตรฐานโดยใช้ความเข้มข้นที่ทราบของมาตรฐานโปรตีนหรือเปปไทด์ จากนั้น วัดค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายตัวอย่าง และสามารถกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์ได้โดยการเปรียบเทียบค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างกับเส้นโค้งมาตรฐาน

การทดสอบแบบแบรดฟอร์ดเป็นวิธีที่ค่อนข้างง่ายและรวดเร็ว แต่ก็มีข้อจำกัดบางประการ ตัวอย่างเช่น ความแม่นยำของการทดสอบอาจได้รับผลกระทบจากการมีผงซักฟอก เกลือ และสารอื่นๆ ในสารละลาย

ข้อควรพิจารณาในการกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์

1. ความบริสุทธิ์ของเปปไทด์

ความบริสุทธิ์ของเปปไทด์เป็นปัจจัยสำคัญที่ต้องพิจารณาเมื่อพิจารณาความเข้มข้น สิ่งเจือปนในเปปไทด์อาจส่งผลต่อความแม่นยำในการกำหนดความเข้มข้น ดังนั้นจึงแนะนำให้ใช้เปปไทด์ที่มีความบริสุทธิ์สูงในการวัดความเข้มข้น ในฐานะซัพพลายเออร์แค็ตตาล็อกเปปไทด์ เรารับประกันความบริสุทธิ์สูงของเปปไทด์ของเราผ่านมาตรการควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด

2. การละลายของเปปไทด์

ความสามารถในการละลายของเปปไทด์ยังส่งผลต่อการกำหนดความเข้มข้นด้วย เปปไทด์บางชนิดอาจมีความสามารถในการละลายต่ำในตัวทำละลายบางชนิด ซึ่งอาจนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเลือกตัวทำละลายที่เหมาะสมและให้แน่ใจว่าเปปไทด์ละลายหมดก่อนที่จะวัดความเข้มข้น

3. การปนเปื้อน

การปนเปื้อนยังส่งผลต่อความแม่นยำของการกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์อีกด้วย ตัวอย่างเช่น หากตัวอย่างปนเปื้อนด้วยโปรตีนหรือเปปไทด์อื่นๆ ผลลัพธ์ที่ได้อาจคลาดเคลื่อนได้ ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องใช้อุปกรณ์ที่สะอาดและปฏิบัติตามขั้นตอนในห้องปฏิบัติการที่เหมาะสมเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน

ตัวอย่างของแค็ตตาล็อกเปปไทด์ของเรา

ที่บริษัทของเรา เรามีแค็ตตาล็อกเปปไทด์หลากหลายประเภท รวมถึงStresscopin - เปปไทด์ที่เกี่ยวข้องกับมนุษย์-TRH - เปปไทด์ที่มีศักยภาพ, และEnterostatin (วัว, สุนัข, สุกร)- เปปไทด์เหล่านี้ได้รับการสังเคราะห์และทำให้บริสุทธิ์อย่างระมัดระวังเพื่อให้มีคุณภาพสูง นอกจากนี้เรายังให้ข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของเปปไทด์แต่ละชนิดเพื่อช่วยลูกค้าของเราในการวิจัย

บทสรุป

การกำหนดความเข้มข้นของแค็ตตาล็อกเปปไทด์เป็นขั้นตอนสำคัญในการวิจัยและการประยุกต์ใช้เปปไทด์ มีหลายวิธีในการพิจารณาความเข้มข้นของเปปไทด์ ซึ่งแต่ละวิธีก็มีข้อดีและข้อจำกัดของตัวเอง ในฐานะซัพพลายเออร์ของแค็ตตาล็อกเปปไทด์ เรามุ่งมั่นที่จะจัดหาเปปไทด์คุณภาพสูงและข้อมูลความเข้มข้นที่ถูกต้องแก่ลูกค้าของเรา หากคุณสนใจแค็ตตาล็อกเปปไทด์ของเรา หรือมีคำถามใดๆ เกี่ยวกับการกำหนดความเข้มข้นของเปปไทด์ โปรดติดต่อเราเพื่อขอหารือและจัดซื้อเพิ่มเติม

อ้างอิง

1. ขอบเขต, RK (1994) การทำโปรตีนให้บริสุทธิ์: หลักการและการปฏิบัติ สปริงเกอร์ - แวร์แล็ก
2. สะพาน, CV, Lundblad, RL, & ราคา, NC (1999) การตรวจวัดโปรตีนในวัสดุชีวภาพ: การทบทวนบทช่วยสอน เทคโนโลยีชีวภาพและชีวเคมีประยุกต์, 30(1), 7 - 20
3. แบรดฟอร์ด เอ็มเอ็ม (1976) วิธีการที่รวดเร็วและละเอียดอ่อนสำหรับการวัดปริมาณโปรตีนในระดับไมโครกรัมโดยใช้หลักการจับตัวของโปรตีนและสีย้อม ชีวเคมีวิเคราะห์, 72(1 - 2), 248 - 254.