ส่วนผสมยาที่ใช้งานของเปปไทด์ (APIs) ได้รับความสนใจอย่างมากในอุตสาหกรรมยาเนื่องจากความจำเพาะสูงความเป็นพิษต่ำและศักยภาพในการรักษาโรคที่หลากหลาย ในฐานะผู้จัดหา Peptide APIs ชั้นนำเรามุ่งมั่นที่จะให้ผลิตภัณฑ์เปปไทด์ที่มีคุณภาพสูงผ่านวิธีการสังเคราะห์ขั้นสูง ในบล็อกนี้เราจะเจาะลึกลงไปในวิธีการต่าง ๆ ของเปปไทด์ API จะถูกสังเคราะห์
การสังเคราะห์เปปไทด์เฟส (SPPS)
การสังเคราะห์เปปไทด์ของแข็ง - เฟสเป็นหนึ่งในวิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดสำหรับการสังเคราะห์ APIs เปปไทด์ วิธีการนี้ได้รับการบุกเบิกโดย Robert Bruce Merrifield ในปี 1963 ซึ่งปฏิวัติการสังเคราะห์เปปไทด์และทำให้เขาได้รับรางวัลโนเบลสาขาเคมีในปี 1984
หลักการพื้นฐานของ SPPs เกี่ยวข้องกับการแนบ C - ปลายทางของกรดอะมิโนตัวแรกกับการสนับสนุนที่เป็นของแข็งที่ไม่ละลายน้ำเช่นเรซิน เรซิ่นนี้ให้แพลตฟอร์มที่มั่นคงสำหรับปฏิกิริยาทางเคมีที่ตามมา กลุ่มอะมิโนของกรดอะมิโนที่ติดอยู่นั้นได้รับการปกป้องด้วยกลุ่มป้องกันที่เหมาะสมโดยทั่วไป FMOC (9 - Fluorenylmethyloxycarbonyl) หรือ BOC (Tert - Butyloxycarbonyl)
เมื่อกรดอะมิโนตัวแรกติดอยู่กับเรซินกลุ่มปกป้องในกลุ่มอะมิโนจะถูกลบออกโดยเปิดเผยกลุ่มอะมิโนที่มีปฏิกิริยา กรดอะมิโนต่อไปที่มีกลุ่มอะมิโนได้รับการปกป้องจากนั้นจะถูกรวมเข้ากับกลุ่มอะมิโนอิสระของกรดอะมิโนที่ติดอยู่ก่อนหน้านี้โดยใช้รีเอเจนต์การเชื่อมต่อ รีเอเจนต์ coupling ที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ dic (n, n ' - diisopropylcarbodiimide), hbtu (o - benzotriazole - n, n, n, n', n ' - tetramethyl - uronium - hexafluoro - ฟอสเฟต) และ hatu Tetramethyluronium hexafluorophosphate)
หลังจากแต่ละขั้นตอนการมีเพศสัมพันธ์กลุ่มอะมิโนที่ไม่ทำปฏิกิริยาจะถูกต่อยอดเพื่อป้องกันการก่อตัวของลำดับการลบ ซึ่งมักจะทำโดยใช้อะซิติกแอนไฮไดรด์ วัฏจักรของ deprotection การมีเพศสัมพันธ์และ capping ซ้ำสำหรับกรดอะมิโนแต่ละตัวในลำดับเปปไทด์ที่ต้องการ
เมื่อลำดับเปปไทด์ทั้งหมดถูกประกอบบนเรซินเปปไทด์จะถูกแยกออกจากเรซิ่นโดยใช้ค็อกเทลที่แตกแยก ค็อกเทลนี้ยังกำจัดกลุ่มปกป้องโซ่ที่มีอยู่ในกรดอะมิโนในระหว่างการสังเคราะห์ เปปไทด์ที่ถูกแยกออกจะถูกทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีการเช่นโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)
วิธีแก้ปัญหา - การสังเคราะห์เฟสเปปไทด์
การแก้ปัญหา - การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสเป็นวิธีที่เก่ากว่า แต่ก็ยังมีข้อดีในบางสถานการณ์ ในวิธีนี้ปฏิกิริยาทั้งหมดเกิดขึ้นในการแก้ปัญหาและเปปไทด์ไม่ได้ติดอยู่กับการสนับสนุนที่มั่นคง
การสังเคราะห์เริ่มต้นด้วยการป้องกันกลุ่มอะมิโนและคาร์บอกซิลของกรดอะมิโนแต่ละตัว คล้ายกับ SPPS กลุ่มปกป้องเช่น FMOC หรือ BOC ใช้สำหรับกลุ่มอะมิโนและกลุ่มเอสเตอร์ใช้เพื่อปกป้องกลุ่มคาร์บอกซิล
ขั้นตอนแรกคือการมีเพศสัมพันธ์ของกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันสองตัวเพื่อสร้าง dipeptide นี่คือความสำเร็จโดยใช้รีเอเจนต์การเชื่อมต่อคล้ายกับที่ใช้ใน SPPS หลังจากการก่อตัวของ dipeptide กลุ่มปกป้องที่ปลายด้านหนึ่งของ dipeptide จะถูกลบออกและจากนั้นจะถูกนำมารวมกับกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันหรือ dipeptide อื่นเพื่อสร้างเปปไทด์ที่ยาวขึ้น
กระบวนการทำซ้ำขั้นตอน - โดย - ขั้นตอนจนกว่าจะได้รับลำดับเปปไทด์ที่ต้องการ หนึ่งในความท้าทายของการแก้ปัญหา - การสังเคราะห์เฟสคือการทำให้บริสุทธิ์ของเปปไทด์ระดับกลางในแต่ละขั้นตอนเนื่องจากส่วนผสมของปฏิกิริยาประกอบด้วยผลิตภัณฑ์ที่หลากหลายและวัสดุเริ่มต้นที่ไม่ได้ทำปฏิกิริยา โดยทั่วไปแล้วการทำให้บริสุทธิ์จะดำเนินการโดยการสกัดการตกผลึกหรือโครมาโตกราฟี
ligation เคมี
สารเคมี ligation เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์ขนาดใหญ่หรือโปรตีนที่ยากต่อการประกอบโดยใช้ SPP แบบดั้งเดิมหรือการแก้ปัญหา - การสังเคราะห์เฟส หนึ่งในวิธีการทางเคมีที่รู้จักกันดีที่สุดคือสารเคมีพื้นเมือง (NCL)
ใน NCL เปปไทด์ที่มีเทอร์มินัล thioester ทำปฏิกิริยากับเปปไทด์อื่นที่มี cysteine terminal cysteine ตกค้าง ปฏิกิริยาเกิดขึ้นภายใต้สภาวะน้ำที่ไม่รุนแรงและส่งผลให้เกิดการก่อตัวของพันธะเปปไทด์ดั้งเดิมระหว่างเปปไทด์ทั้งสอง
กระบวนการนี้เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์เปปไทด์สองกลุ่มขึ้นไปครั้งแรกโดยใช้ SPPS หรือโซลูชัน - การสังเคราะห์เฟส เซ็กเมนต์หนึ่งถูกเตรียมด้วย t thioester เทอร์มินัลและส่วนอื่น ๆ ที่มี cysteine เทอร์มินัล ส่วนเหล่านี้จะถูกผสมในบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมและปฏิกิริยาของ ligation จะเกิดขึ้น หลังจาก ligation ถ้าจำเป็น cysteine ตกค้างสามารถแก้ไขเพิ่มเติมหรือใช้เป็นที่จับสำหรับปฏิกิริยาเคมีเพิ่มเติม
การสังเคราะห์คอนเวอร์เจนซ์
การสังเคราะห์คอนเวอร์เจนซ์เป็นกลยุทธ์ที่รวมข้อดีของทั้ง SPPS และสารเคมี ligation แทนที่จะสังเคราะห์ลำดับเปปไทด์ทั้งหมดในรูปแบบเชิงเส้นเปปไทด์จะแบ่งออกเป็นส่วนเล็ก ๆ ซึ่งถูกสังเคราะห์แยกกันโดยใช้ SPPS
ส่วนเหล่านี้จะถูกรวมเข้าด้วยกันโดยใช้วิธีการทางเคมี ligation วิธีการนี้ช่วยลดจำนวนขั้นตอนการมีเพศสัมพันธ์ที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์เปปไทด์ขนาดใหญ่ซึ่งสามารถปรับปรุงผลผลิตโดยรวมและความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย ตัวอย่างเช่นเปปไทด์ยาวสามารถแบ่งออกเป็นสามหรือสี่ส่วนแต่ละส่วนมีกรดอะมิโน 10 - 20 เซ็กเมนต์เหล่านี้ถูกสังเคราะห์บนเรซินแยกออกจากนั้นจึงถูกเชื่อมโยงในลักษณะที่บรรจบกัน
ตัวอย่างของ API เปปไทด์ของเรา
เรานำเสนอ API เปปไทด์ที่หลากหลายรวมถึงC20 - OTB - GLU (OBBU) - ATBI10 - ATBU) ภาพถ่าย - O OIE - OANA - OE-C20 (OTBU) - GLU (OTBU), และPalmitoyl - Glu (OSU) - Otbu- เปปไทด์เหล่านี้ถูกสังเคราะห์โดยใช้วิธีการขั้นสูงที่อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อให้มั่นใจถึงความบริสุทธิ์และคุณภาพสูง
การควบคุมคุณภาพในการสังเคราะห์เปปไทด์ API
การควบคุมคุณภาพมีความสำคัญสูงสุดในการสังเคราะห์ API ของเปปไทด์ เรามีระบบควบคุมคุณภาพที่ครอบคลุมเพื่อให้แน่ใจว่าผลิตภัณฑ์ของเราเป็นไปตามมาตรฐานสูงสุด
หลังจากการสังเคราะห์เปปไทด์จะถูกวิเคราะห์โดยเทคนิคต่าง ๆ รวมถึง HPLC, mass spectrometry (MS) และ resonance แม่เหล็กนิวเคลียร์ (NMR) HPLC ใช้เพื่อกำหนดความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ในขณะที่ MS ใช้เพื่อยืนยันน้ำหนักโมเลกุลของเปปไทด์ NMR สามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับโครงสร้างและโครงสร้างของเปปไทด์
นอกจากนี้เรายังทำการศึกษาความมั่นคงเพื่อให้แน่ใจว่า API เปปไทด์ยังคงมีเสถียรภาพภายใต้เงื่อนไขการจัดเก็บที่แตกต่างกัน ซึ่งรวมถึงการทดสอบเปปไทด์ที่อุณหภูมิที่แตกต่างกันค่า pH และการปรากฏตัวของสารเพิ่มปริมาณต่างๆ
บทสรุป
การสังเคราะห์ Peptide API เป็นกระบวนการที่ซับซ้อนและหลายขั้นตอนที่ต้องใช้เทคนิคขั้นสูงและการควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด ในฐานะซัพพลายเออร์ Peptide APIs เรากำลังสำรวจวิธีการและเทคโนโลยีใหม่ ๆ อย่างต่อเนื่องเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพและคุณภาพของการสังเคราะห์ของเรา ไม่ว่าจะเป็นผ่านการสังเคราะห์เปปไทด์ที่เป็นของแข็งการแก้ปัญหา - การสังเคราะห์เฟส, สารเคมี ligation หรือการสังเคราะห์คอนเวอร์เจนซ์เรามุ่งมั่นที่จะให้ลูกค้าของเราด้วยผลิตภัณฑ์เปปไทด์ที่มีคุณภาพสูง
หากคุณมีความสนใจในการซื้อ API เปปไทด์ของเราหรือมีคำถามใด ๆ เกี่ยวกับการสังเคราะห์เปปไทด์โปรดติดต่อเราสำหรับการอภิปรายการจัดซื้อจัดจ้าง เราหวังว่าจะได้ทำงานร่วมกับคุณเพื่อตอบสนองความต้องการของเปปไทด์ API ของคุณ
การอ้างอิง
- Fields, GB, & Noble, RL (1990) การสังเคราะห์ของแข็ง - เฟสเปปไทด์โดยใช้กรดอะมิโน Fluorenylmethoxycarbonyl 9 - วารสารนานาชาติของการวิจัยเปปไทด์และโปรตีน, 35 (2), 161 - 214
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I. , & Kent, SBH (1994) การสังเคราะห์โปรตีนโดยสารเคมีพื้นเมือง วิทยาศาสตร์, 266 (5186), 776 - 779
- Chan, WC, & White, PD (2000) การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง FMOC: วิธีการปฏิบัติ สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยออกซ์ฟอร์ด